Selective synthetic growth medium "Acinetobacter phenylalanine agar" for isolation and identification of Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii complex species ; Селективная синтетическая питательная среда «Ацинетобактер фенилаланин агар» для выделения и идентификации бактерий комплек...
The aim of the study was to carry out clinical and microbiological testing of selective growth medium Acinetobacter phenylalanine agar to isolate and identify bacterial species belonging to the Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii complex (ACB complex). For this, 400 samples of clinical material (wound discharge, blood, urine, bronchoalveolar lavage) were examined in 2018 in the Clinical and Bacteriological Laboratory of the Military Medical Academy by using routine assays (seeding on blood agar growth medium, pure culture isolation and identification by using biochemical assays as well as VITEK 2 microbial identification system, bioMerieux) and plating together with growth medium Acinetobacter phenylalanine agar selective to Acinetobacter spp. owing to L-phenylalanine as a sole nitrogen and carbon source additional selected with trimethoprim. ACB complex Acinetobacters were identified 18–24 hours later after incubation at 37°C by emergence of typical colonies on selective medium. Control tests for cytochrome oxidase as well as oxidative/fermentation (OF)-glucose test by using peroxide-hydrogen microvolume method (for 1 h) allowed to rapidly distinguish ACB complex Acinetobacters from other bacteria as well as from Acinetobacter spp. unable to glucose oxidation. Next, species identity for all isolated Acinetobacter strains was established by using matrix-activated laser desorption/ionization with time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). It was found that by using novel vs. routine assay Acinetobacter spps. were isolated in 26 (18 samples — in monoculture, 8 — in association with Pseudomonas aeruginosa or Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae with tiny associate colonies) vs. 20 (7 — in monoculture, 13 — in association with Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella, Escherichia, Citrobacter, Providencia, Staphylococcus, Enterococcus, C. albicans). Using MALDI-TOF MS method revealed that 25 out of 26 Acinetobacter strains isolated on selective growth medium belonged to the ACB complex (A. baumannii — 23, A. pittii — 2), whereas one strain (A. baylyi) did not belong to ACB complex. Hence, the diagnostic specificity of the Acinetobacter phenylalanine agar synthetic growth medium for isolation and identification of the A. calcoaceticus — A. baumannii complex species comprised 96.2%, with diagnostic sensitivity exceeding that one for routine assay by 25%. Use of selective growth medium accelerates research by allowing to isolate and identify ACB complex Acinetobacter spp. 18–24 h later after plating clinical material. Selectivity of growth medium was potentially stable, as its major trophic selection factor did not depend on acquired bacterial antibiotic resistance, which is also suitable as a synthetic growth medium for standardized studies. ; Цель исследования — клинико-микробиологическая апробация селективной питательной среды «Ацинетобактер фенилаланин агар» для выделения и идентификации бактерий комплекса Acinetobacter calcoaceticus — Acinetobacter baumannii (комплекса АСВ). В 2018 г. клинико-бактериологической лаборатории Военно-медицинской академии были изучены 400 проб клинического материала (отделяемое ран, кровь, моча, бронхо-альвеолярные смывы) параллельно традиционным методом [посев на кровяной агар, выделение и идентификация чистых культур биохимическими тестами и микробиологическим анализатором «Vitek 2» (bioMerieux)] и посевом на чашки с питательной средой «Ацинетобактер фенилаланин агар». Селективность этой среды обусловлена трофической селекцией ацинетобактеров L-фенилаланином в качестве единственного источника азота и углерода и дополнительной селекцией триметопримом. Ацинетобактеры комплекса АСВ идентифицировали через 18–24 ч инкубации при 37°С по наличию характерных колоний на селективной среде. Контрольные тесты на цитохромоксидазу и ОФ-тест с глюкозой пероксидводородным микрообъемным методом (в течение 1 ч) позволяли в экспресс-режиме отличать ацинетобактеры комплекса АСВ от других бактерий и группы ацинетобактеров неокисляющих глюкозу. Далее определяли вид всех выделенных штаммов ацинетобактеров методом матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации с время пролетной масс-спектрометрией (MALDI-TOF MS). Ацинетобактеры были выделены на селективной среде в 26 пробах (18 проб в монокультуре, 8 — в ассоциации с Pseudomonas aeruginosa или Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae при очень мелких колониях ассоциантов); традиционным методом — в 20 пробах (7 — в монокультуре, 13 — в ассоциациях с синегнойной палочкой, клебсиеллами, эшерихиями, цитробактером, провиденциями, стафилококками, энтерококками, C. albicans). Методом MALDI-TOF MS было установлено, что из 26 штаммов ацинетобактеров, выделенных на селективной среде, 25 относятся к комплексу АСВ (A. baumannii — 23, A. pittii — 2). Один штамм (A. baylyi) не относился к видам комплекса АСВ. Следовательно, диагностическая специфичность селективной синтетической питательной среды «Ацинетобактер фенилаланин агар» по выделению и идентификации бактерий комплекса A. calcoaceticus — A. baumannii составляет 96,2%, а ее диагностическая чувствительность превышает на 25% традиционный метод. Применение селективной среды ускоряет исследование — выделение и идентификация ацинетобактеров комплекса АСВ завершается через 18–24 ч после посева клинического материала. Селективность питательной среды потенциально стабильна, так как ее основной трофический фактор селекции не зависит от приобретенной антибиотикоустойчивости бактерий. Как синтетическая питательная среда она пригодна для стандартизованных исследований.